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  • La sección III del módulo experimental se enfoca en la obtención de uno de los componentes centrales del sistema CRISPR-Cas9: la proteína nucleasa.

    Durante esta actividad, se inducirá la expresión de la proteína SaCas9 recombinante en un sistema bacteriano, para luego proceder a su extracción y purificación mediante cromatografía de afinidad basada en su tag de histidinas. A lo largo del proceso, se obtendrán distintas fracciones (lisado, soluble, percolado, lavados y eluato) que permitirán evaluar la eficiencia de la expresión y purificación.

    Posteriormente, se analizarán las muestras mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) y tinción con azul de Coomassie, lo que permitirá visualizar la presencia, tamaño y grado de pureza de la proteína obtenida. De esta manera, se integran los conceptos de expresión heteróloga, purificación y análisis de proteínas en el contexto de la generación de herramientas funcionales para edición génica.

    No olviden traer túnicas si tienen a disposición.